复合微生物肥料的检测标准
黎乃维+姜齐永
【摘 要】实验以市场上的微生物肥料为研究目标，从样品中分离菌株，并通过菌落形态、革兰氏染色、生化等实验鉴定出3株菌株，结果菌株A为褐球固氮菌，菌株B為球形芽孢杆菌，菌株M为藤黄微球菌。
【关键词】微生物肥料；菌株；分离与鉴定
【Abstract】In this study， microbial fertilizer was bought from market as the research object. And 3 strains separated from it. The representative strains of them were marked as A， B， M. Pure bacterial culture and identification showed that the strain A attributed to Azotobacter chroococcum， the strain B was Bacillus spaericus， the strain M was Micrococcus luteus.
【Key words】Microbial fertilizer； Bacterial strain； Separate and identify
近百年来，农药和化肥的施用对农业生产作出了巨大的贡献，但长期过分的对化学肥料和农药的依赖，造成大量不可再生能源的浪费，如农田有机质不足，土壤板结、结块，肥力下降，农作物品质降低。随着生态农业和绿色食品生产的兴起和发展，微生物肥料逐步引起了人们的重视[1]。由于微生物肥料具有培肥地力、改良土壤、抗旱、促早熟的功效，可以消减因大量使用化学肥料而引起的环境质量等优势，得到了很大的发展空间，并成为国内外研究的热点[2-3]。微生物肥料是活菌制剂，其肥效与活菌数量、强度及周围环境条件都密切相关，包括温度、水分、酸碱度、营养条件及微生物之间的相互作用都有一定影响。为此，对复合微生物肥料中主要细菌进行研究鉴定，以期人们更好地认识和应用有良好前景的微生物肥料。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 供试样品
本实验样品为某液态复合微生物肥料，试验中分离、鉴定等试验的细菌均来源于此样品。
1.1.2 培养基
培养基配方和浓度按照《微生物学实验》[4]、《伯杰氏细菌鉴定手册》[5]及《一般细菌常用鉴定方法》[6]配制。
1.1.3 培养条件
除了特别说明外，培养条件为 30℃、200r/min，培养时间为2d。
1.2 实验方法
1.2.1 样品的处理
将购置的某复合微生物肥料（液体）迅速带回实验室，放入冰箱低温4℃保存。移取摇匀后的样品10mL到装有90mL的无菌生理盐水的锥形瓶中，摇匀，制成菌悬液，得到10-1的稀释液。移取1 mL稀释液到9 mL无菌水中，摇匀，得到10-2稀释液。反复稀释可以得到10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8等细菌稀释梯度。
1.2.2 细菌的分离
选取三个稀释度（10-3、10-4、10-5）的菌悬液0.1mL涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上，30℃恒温培养2-3d。通过观察菌落的形态特征，将平板培养基上生长良好的菌落，按照菌落大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等特征，用酒精灯烧过灭菌的冷接种针分别挑取不同种类的菌落至新鲜的牛肉膏蛋白胨培养基上，30℃培养1-2d。经过2-3次平板划线纯化菌种，将细菌转种到斜面培养基上，置冰箱4℃下保存。
1.2.3 细菌的鉴定
根据《伯杰氏细菌鉴定手册》[5]第八版及《一般细菌常用鉴定方法》[6]对分离细菌进行革兰氏染色、鞭毛染色、芽抱染色和对糖、酶的生理生化反应测定等实验，鉴定分属。
2 结果与讨论
2.1 菌株的分离与鉴定结果
观察各培养皿中的菌落形态、大小、颜色等特征，挑取幼培养物的菌落进行革兰氏染色和荚膜染色，镜检，观察各细菌的形态特征，挑取较老的菌落进行芽孢染色，从中鉴定出3株菌株，并对3株菌株进行解磷、解钾、固氮试验，表1是试验结果。
表2是三种菌株与相似菌株生理生化特征比较结果。菌株A是大的椭圆形细胞，直径2.5 um，细胞单个，革兰氏阳性，不形成芽孢，产生荚膜粘液，能够固氮，这些特征与褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）的特征吻合。从表2可以看出，菌株A的生理生化特征试验结果与其相似菌株褐球固氮菌的特征一致，可将菌株A定为褐球固氮菌。褐球固氮菌为固氮菌属，能进行生物固氮是该属的主要特征。它在土壤中广泛存在，增加土壤肥力，可以促进作物生长。
菌株B是短杆状得细胞，呈链状排列，革兰氏阳性，有芽孢，这些特征与芽孢杆菌属的特征吻合。从表2可以看出，菌株B的生理生化特征试验结果与其相似菌株球形芽孢杆菌（Bacillus spaericus）的特征一致，鉴定为球形芽孢杆菌。球形芽孢杆菌是一种在自然界中广泛分布、形成亚末端膨大孢子囊和球形芽孢的好气芽孢杆菌。球形芽孢杆菌的杀蚊谱较窄，其中对库蚊属幼虫的毒性最强，在污水中的药效维持时间较长，特别适用于污水中孳生的库蚊属幼虫（淡色库蚊和致倦库蚊）的控制。
菌株M细胞是微球状、堆形，菌落致密光滑，泛黄，这些特征都与藤黄微球菌相符合。从表2可以看出，菌株M的生理生化特征试验的结果与其相似菌株藤黄微球菌（Micrococcus luteus）的生理生化特征一致，将它鉴定为藤黄微球菌。 藤黄微球菌多见于土壤和水中，也见于人和动物的皮肤上，为非致病菌。
3 结论
论文通过一系列试验对样品复合微生物肥料中菌株进行分离，得到3株菌株，并定性分析了它们的解钾、解磷、固氮能力，通过对3株菌株的生理生化试验及与相似菌株的特征比较，鉴定出菌株A为褐球固氮菌，菌株B为球形芽孢杆菌，菌株M则为藤黄微球菌，查阅文献分析了3株菌株的生活习性和作用。
【参考文献】
[1]葛诚.微生物肥料生产应用基础[M].北京：中国农业科技出版社，2000：13-14.
[2]葛诚.微生物肥料研究、生产和应用的几个问题[J].微生物学通报，1995（6）：27-32.
[3]吴薇，葛诚.我国微生物肥料生产和应用现状的调查研究[J].微生物学通报，1995（2）：25-29.
[4]沈萍.微生物实验，第4版[M].北京：高等教育出版社，2013.
[5]R.E.布坝南，N.E.吉本斯.伯杰氏鉴定手册，第8版[M].北京： 科学出版社，1984.
[6]中国科学院微生物研究所细菌分类组编著.一般细菌常用鉴定方法[M].北京：科学出版社，1978.
[责任编辑：朱丽娜]endprint
