2013年微生物检验技术考试模拟试卷及解析 人民军医版 袋装
李文超
【摘 要】饮用水的水质与人体健康密切相关，水质的问题一直是普遍关注的焦点。饮用水水质对人体健康的影响的一个主要方面是微生物风险，微生物风险主要是由饮用水中致病微生物引起的。本次研究采用随机取样的方法收集了济南市相距较远的集中供水的居民家中供水管网末梢水，通过对细菌总数的研究，了解济南市居民生活用水的质量。
【关键词】济南市；生活用水；细菌总数；质量
0 引言
（1）饮用水中的微生物
水微生物主要是检测水中微生物种类，通俗来讲也可以说是检测水中各类菌种，包括菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌、乳酸菌、霉菌、沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、光合细菌等各类细菌、真菌等。
（2）饮用水微生物检测方法
国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。
按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。
1 实验条件与方法
1.1 实验材料
营养琼脂、蒸馏水
1.2 实验仪器与设备
培养皿、烧杯、玻璃棒、量筒、滴管、试管、试管冒、试管架、锥形瓶、酒精灯、电炉、溶解锅、托盘天平、药匙、平板、接种环、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、纱布、牛皮纸、细绳、细口瓶、移液管、橡胶塞、记号笔、标签、吸水棉
1.3 实验方案
1.3.1 培养基的配置
1.3.1.1 称取和配制
根据要倒平板的数量计算各种需要的原材料的量，用托盘天平分别称取蛋白胨、琼脂、氯化钠，用量筒量取蒸馏水，放入溶解锅中，用电炉加热溶解，加热过程中不断用玻璃棒搅拌。防止其焦化或溢出容器。
1.3.1.2 澄清、过滤
用两层纱布，中间夹有薄层吸水棉，趁热进行过滤，直至透明无沉淀。
1.3.1.3 灭菌
将配制好的培养基倒入锥形瓶中，用纱布将锥形瓶口塞全，然后用牛皮纸包好细绳将瓶口封紧放入高压蒸汽灭菌锅中，103.43kPa（121.3℃）压力灭菌30分钟。
1.3.1.4 倒平板
灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在超净工作台上操作进行。
1..3.1.5 检定
一般性状的检定；
无菌检查：将配制好的培养基放到培养箱中培养24-48小时，取出观察，若无细菌生长则为合格。
1.3.2 取样
1.3.2.1 采样点分布与采样时间
采样点：随机选择济南市相距较远的集中供水的小区，在居民家中选取供水管网末梢水。
采样时间：统一时间在不同地点取水，分工进行。
1.3.2.2 采样方法
采样时应先打开水龙头放水两分钟，排除沉积物。
采样前先对水龙头进行消毒。
采集水样不用过满，细口瓶的2/3即可，盖好试管帽，送回实验室。
贴标签，注意标记好取样地点、时间、数值，并且记录好原始记录表。
取样时直接采集，避免用水样刷洗已灭菌的取样瓶，并避免双手或其他物品对取样瓶口的污染
此水样仅限于本实验使用，禁止带回实验室供其他指标测定使用。
1.3.3 培养
1.3.3.1 梯度稀释
梯度稀释操作时应执行无菌操作，试管口和移液管应在火焰的1-2cm处。从10ml取水中取1ml 置于相应的含有9ml的无菌蒸馏水中得到10-1浓度的稀释原液再按上述方法分别做成10-2、10-3、10-4的浓度的稀释溶液，分别贴好标签作好记录，放在试管架上待用。
1.3.3.2 接种
点燃酒精灯，将滴管放置于外焰中进行消毒，约3～5秒；
左手持培养基，右手持滴管，分别吸取各个梯度的稀释溶液1ml，滴在培养基表面，并且用接种环在培养基表面涂抹均匀；
接种完毕，培养基倒置放置于恒溫培养箱中培养24–48小时。
1.3.3.3 菌群计数
培养后，计数每个平板上的菌群数，尤其是大肠杆菌菌群，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在记下各平板菌群总数后，求出用稀释后的各平板菌群数，计算出原始样品每ml的菌群数。
1.3.4 数据处理
根据公式N=∑C/2×d. N——中菌落数。∑C——平板中菌落数之和 d——稀释度，可计算出N（cfu/ml）的值即样品中菌落数。
2 实验结果与分析
2.1 济南市居民生活用水中的微生物含量
实验结果显示，济南市居民生活用水中微生物的含量有一定差异，菌落含量由多到少为：农机小区>十里堡2>柿子园1>十里堡1，其他地点经过培养并未得到有效的菌落，无法计数。
2.2 对济南市居民生活用水中的微生物含量分析
从图表中的数据可以看出农机小区、十里堡、柿子园这些地区取的四个水样培养出了大肠杆菌，其他地区并未培养出相应的菌落，也没得到有效的数据。根据已有数据个公式关系的推算，其中十里堡、柿子园的三个水样并未超出国家饮用水标准（中国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个），而农机小区的第三个稀释水样却出现了超标的问题。
问题分析：
1）十里堡与柿子园由于村镇原因，并不是24小时供水，居民都是在一天固定时间接水，用水桶储存，取样时没有赶上放水时间，因此选取的是居民的储存水。在这储存水中，并不清楚储存的具体时间，所以，实验结果尚有一定的不精准性。
2）农机小区的结果比较令人吃惊，本身小区位于济钢附近，一段时间以来正在修路，并且取水时经过询问并未安装净化器，所以居民用水存在一定问题。
3）十里堡1的水样中在10-1稀释液为观察到菌落而在10-2稀释液中发现菌落这种情况下应该是操作过程中的问题，分两个方面看，一是，在操作过程中10-1稀释液应该有菌落生长但是未长；二是，10-2稀释液中不应该生长菌落，但是生长，也有可能是实验过程受到污染。同理，农机小区的10-3稀释液也不排除这种可能。
3 结论
通过本实验，得出了随机取样的济南市居民生活用水中的微生物数量。其中，协和学院，冶金技师学院和郭西小区的饮用水能达到国家标准；通过十里堡和柿子园可以看出对于居民的供水经过一段时间的存放，都会产生一定的细菌，所以在饮用前一定要进行灭菌，可以采用最简单常用的加热煮沸，就可以杀死绝大多数水中的细菌；通过农机小区可以看出，在家中安装净水器是有必要的，而且只是通过供水公司的达标并不一定能够保证到达居民家中时还是与出厂时一致，运输中也有可能发生不可预估的状况。
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[责任编辑：张涛]endprint
