华北某规模化猪场O型口蹄疫疫苗免疫状况调查与分析
猪链球菌是一种人畜共患的急性，热性，败血性传染病，现在已经成为规模化养猪场中最常见的细菌性疾病之一，主要病原体为2型猪链球菌。该病在临床上可表现为败血症型、脑膜炎型、关节炎型、淋巴结脓肿型等多种类型。本次调查通过对西宁及海东地区9个规模猪场进行采样，血清学检测，初步掌握了猪链球菌2型感染情况，现将检测情况总结如下。
一、材料与方法
1.材料
（1）血样。共采集血样592份，来自湟源成农生猪养殖有限公司，宏源仔猪繁育合作社，互助八眉猪原种繁育场，互助恒丰养殖场，大通桦林德隆仔猪繁育场，大通县种猪场，乐都容生生态养殖有限公司，樂都福乐牧业有限公司，乐都丰源仔猪繁育有限公司，共计9个规模养猪场，分离血清-20℃保存备用。
（2）试剂。猪链球菌2型ELISA抗体检测试剂盒，试剂生产厂家为武汉科前生物，试剂批号120903。
2.方法
（1）试验方法。
① 洗涤液配制 。使用前，浓缩的洗涤液恢复至室温（20-25℃），并摇动使沉淀溶解，用蒸馏水作20倍稀释，，混匀。
②样品稀释液配制。 将2.5g脱脂奶粉溶于50ml稀释液瓶中，作为待检血清和对照血清的稀释液。
③待检血清和对照稀释。 将待检血清在血清稀释板中用样品稀释液按1：40的比例稀释，阳性和阴性对照用样品稀释液按1：4稀释。
④取抗原包被板，先用稀释好的洗涤液洗版2次，再将稀释好的待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清各取100ul加入到抗原包被板孔中。阴性对照和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品，置37℃温育30分钟。
⑤甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200ul，静置3分钟后倒掉，并在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。
⑥每孔加酶标二抗100ul，置37℃温育30分钟。
⑦ 甩掉板孔中的溶液，洗涤方法同1.2.1.5，共计洗涤5次。
⑧每个反应孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul，混匀，室温（18-25℃）避光显色10分钟。
⑨ 待显色完成后每个反应孔加终止液50ul，10分钟内测到结果。
（2） 结果判定。
在酶标仪上测各孔OD630值，试验成立条件是阳性对照孔OD630值均应≥0.8；阴性对照孔OD630均应<0.3。如果样品OD630值≥0.35，判为阳性；如果样品OD630值<0.35，则判为阴性。
二、结果
三、分析与讨论
1.本次检测所抽样的9个规模猪场均未进行过猪链球菌2型的免疫，但是均检测出其抗体阳性，说明各个规模场均存在不同程度感染。其中6个规模猪场的阳性率高于40%，说明猪链球菌2型在我省规模猪场处于高发状态。
2.猪链球菌2型抗体阳性率表现为仔猪﹤育肥猪﹤种公猪、母猪；这可能是因为随着猪龄的增加，配种、产仔等生产活动频繁，与外界环境接触时间变长，其受感染的概率和程度增加有关。同时说明生产母猪和种公猪在这些疫病的传播中起着极为重要的作用。
3.鉴于当前我省猪链球菌2型感染率较高的形势，各规模化养殖场应当通过疫病监测，制定符合自身实际情况且科学有效的免疫程序，同时要制定严格的疫苗接种操作规程，做到按程序免疫保证接种质量。对于已经感染的病猪，要及时隔离，消毒，并给予敏感抗菌药治疗。
与此同时要进一步加强种公猪引种检疫工作。在引种前最好开展血清学和病原学监测工作，杜绝染疫动物入群并污染整个猪场。同时还要做好入圈前的隔离观察工作，确保无疫方可入群。
作者简介：游潇倩（1987-10-），女，籍贯：山东省，学历：本科，毕业于南京农业大学，现有职称：助理兽医师，研究方向：实验室诊断。
