...检测及其转基因成分在饲料加工工艺中的降解规律研究
陈薇
摘 要：采用溶剂提取法提取黄藤主要成分巴马汀，通过对比实验并计算提取率，寻求提取黄藤主要成分巴马汀的优化条件，并采用薄层色谱法进行成分分离，再用紫外—可见分光光度法测定盐酸巴马汀的相对纯度。
关键词：黄藤；提取；巴马汀；盐酸巴马汀；薄层色谱；紫外—可见光分光光度
DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2017.13.025
0 前言
黄藤又名红藤，为防己科丛生攀援藤本，单性花，雌雄异株，是我国热带和南亚热带森林中的主要伴生植物。黄藤所含主要成分为巴马汀。尚含少量药根碱、黄藤素甲、黄藤素乙、黄藤内脂及甾醇。巴马汀又名掌叶防已碱，为季铵生物碱，黄藤中巴马汀含量为2.5-3%。黄藤药用有效成分巴马汀，有广泛的抗菌、降压、治疗浮肿、明显的增加白细胞吞噬能力的作用，经氢化得四氢巴马汀（延胡索乙素）有镇痛、镇静作用[1]。药根碱对中枢神经有麻醉和降血压的效能。本研究采用溶剂提取法提取黄藤主要成分巴马汀，通过对比实验并计算提取率，寻求提取黄藤主要成分巴马汀的优化条件，并采用薄层色谱法进行成分分离，再用紫外—可见分光光度法测定盐酸巴马汀的相对纯度。实验表明，其提取率对比：乙醇回流提取法（1.97%）>硫酸煎煮法（1.61%）>醋酸煎煮法（1.25%）>硫酸冷浸法（1.16%），采用乙醇回流提取法得到的产率最高，产品纯度高，色泽好。
1 材料与方法
1.1 实验材料
植物黄藤（越南产），硫酸，草酸，乙醇（95%），盐酸，氢氧化钠，精制食盐，硅胶G，羧甲基纤维素钠（CMC-Na），三氯甲烷，甲醇，甲苯，氨水，乙酸乙酯，异丙醇，石油醚（以上均为分析纯）
1.2 提取实验
1.2.1 提取实验流程图
1.2.2 提取实验方法
（1）酸水提取条件：分别在常温和加温到60℃用5，10，15，20，25mL/L硫酸溶液，5，10，15，20，25mL/L乙酸溶液进行提取，其他提取条件相同下，确定溶剂后，在最佳提取溶剂提取下，碱化条件pH 值为分别为 6.0，7.0，8.0，9.0，10.0，11.0，再确定碱化条件。
（2）乙醇回流提取法：取黄藤粗粉100g，用95%乙醇加热回流提取2次，每次1小时，每次乙醇用量为200ml，抽滤，合并二次醇提取液，旋转蒸发浓缩至15-20ml，转移到50ml小烧杯中，密封放置24h，析晶，抽滤，干燥，得巴马汀粗品。（平行实验5次），计算和对比提取率.
1.3 分离、成盐、精制实验
酸水提取法：将酸、醇粗巴马汀，分别加80%乙醇100ml，加热回流使溶，用10ml水溶解后（可在水浴上加热），乘热抽滤，向滤液中滴加6N盐酸溶液至pH=2放置，即有金黄色针状结晶析出，抽滤，得盐酸巴马汀粗品。
精制：将盐酸巴马汀粗品用滴管加入95%乙醇使结晶恰溶解（可在水浴上加热），抽滤得澄清液，密封放置析晶。在形成一批结晶后（放置约24h），立即倾出上层溶液，然后再密封放置以得到第二批结晶。母液再经同样方法处理又可得到第三批结晶。这些晶体纯度不同不可贸然混和。
1.4 紫外分光光度法检测实验
（1）样品制备：a.对照品：选取自制的盐酸巴马汀产品中最好的、一份产品配制成0.499mg/mL盐酸巴马汀对照品溶液。b.供试验品溶液制备：氯化巴马汀：醋酸法0.0532g、硫酸法0.0522g、乙醇法0.0501g，溶于100mL容量瓶中，定容。
（2）最大吸收波长的选择：取对照品溶液2ml置于100mL容量瓶， 定容。以水为空白，在200到490nm波长范围选择吸光度。
（3）标准曲线：分别精密量取对照品溶液0.5mL，1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，分别置于100mL容量瓶中，定容。以水为空白，以273nm波长测定吸收度，绘制标准曲线，以吸收度（A）对取用量（c）进行线性回归，得回归方程。
（4）重现性试验：分别取冰醋酸法、硫酸法、乙醇法供試品溶液各5份，以水为空白测定吸收值，根据标准曲线，计算样品含量。
（5）加样回收率试验：分别量取醋酸法、硫酸法、乙醇法供试品液各6份，每份1.0ml，置于100ml容量瓶中，再分别加入对照品溶液0.25ml，0.5ml，1.0mL，1.5mL，1.25ml，1.75ml（各2份），加水至刻度，摇匀，进行测定。
2 实验结果
2.1 最优提取实验方法的实验结果
（1）分别以酸水进行的冷浸法和加热法作提取，巴马汀得率的比较，见表1。
同一批样品，提取方法不同，巴马汀的得率相差很大，加热法的巴马汀得率较冷浸法的得率高。
（2）乙醇回流提取法得率结果（见表2）。
乙醇回流提取法较酸水提取法得率要高，在析晶时晶体颜色比较纯正，为黄色针状晶体。
2.2 提取条件的探索结果
（1）不同浓度硫酸溶液和乙酸溶液提取的产品得率的比较[4] ，见表3。
（2）不同pH条件下的产品得率比较[3]，见表4。
当pH值 6.0～10.0时产品得率随着pH值的增加而增加，当pH值10.0时产品得率高为1.75%。
3 紫外分光光度法检测实验[5]
本实验采用提取效果最佳的氯化巴马汀产品作为对照品，以水为参比，测定其在不同波长下的吸光度，得出氯化巴马汀最大吸收波长，并在最大吸收波长处测定标准曲线，其他提取出的产品用同样的方法测定吸光度，对比标准曲线，即可以得到各提取方法提取出产品的相对含量。
（1）最大吸收波长的选择、绘制标准曲线（如图3、4）。
结论：盐酸巴马汀溶液的最大吸收波长为273nm。对照品的标准曲线公式为：
y = 60.909x + 0.0186。R2=0.9981，符合标准曲线的偏差要求。
（2）稳定性、精密度试验（如图5、6）。
结论：随着时间的变化，吸光度值无明显变化。精密度试验的SV值为0.26%，精密度比较高。
（3）重现性试验。分别进行醋酸法重现性试验， 硫酸法重现性试验，乙醇法重现性试验，以及加样回收率试验。以确定其实验的重现性、回收率、以及变异系数。
结果讨论：
1）由重现性试验表可知：醋酸法SV值为0.29%，重现性较好，由标准曲线計算得冰醋酸法提取得到的盐酸巴马汀相对于对照品的相对含量为80.02%。
2）同样可知由硫酸法提取的SV值为0.33%，重现性较好，相对含量为57.93%。
3）a）乙醇法提取的SV值为0.34%，重现性较好，相对含量为82.88%。
b）冰醋酸法加样回收试验加样平均回收率为100.36%，变异系数SV为0.71%。
c）硫酸法加样回收试验加样平均回收率为99.94%，变异系数SV为0.42%。
d）乙醇法加样回收试验加样平均回收率为100.88%，变异系数SV为0.73%。
4 结论
（1）黄藤中巴马汀的提取宜采用，乙醇回流提取法，得率要高，且需快速液抽滤，慢慢结晶的方法，可得析出晶体颜色比较纯正的黄色针状晶体盐酸巴马汀，粗巴马汀用水溶解分离，可得粗黄藤内酯。黄藤内酯粗品反复以酒精、丙酮重结晶，得光亮棱状的黄藤内酯精品。
（2）根据紫外-可见分光光度法测定，醋酸法、硫酸法和95%乙醇法提取的氯化巴马汀相对含量分别为80.02%， 57.93%， 82.88%乙醇提取法比酸水提取法得到的氯化巴马汀的纯度较高。
参考文献：
[1]高丽，符德欢，戚育芳等.云南药用植物大黄藤的资源现状及保护意见[J].药品评价，2005，02（01）：7+22.
[2]唐爱莲，刘笑甫，冯冬梅.用煎煮法和冷浸法对黄藤中巴马丁成分提取的比较研究[R].华夏医学，16（01）：75-76.
[3]李晓莹，廖华卫.pH值对黄藤中巴马汀盐析的影响[J].广东药学院学报，1999，15（03）：190-191.
[4]马云淑.不同实验条件对黄藤中掌叶防己碱提取率的影响[J].云南中医学院学报，1999，21（03）：21-22.
[5]周敏，杨秀兰，成中太.紫外分光光度法测定黄藤素注射液中盐酸巴马汀含量的探索[J].合成化学，20019（01）：379-381.
